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      ELISA實驗操作要點:ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

      更新時間:2017-03-02      瀏覽次數:2672

      ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎,ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總如下:
      1、ELISA實驗包被緩沖液
      2、ELISA實驗洗滌緩沖液
      3、ELISA實驗稀釋液
      4、ELISA實驗終止液
      5、ELISA底物緩沖液
      6、ELISA實驗TMB四甲基聯苯胺、使用液
      7、ELISA實驗ABTS使用液
      8、ELISC

      試劑

      1、ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

      NaHCO3    1.59g
      NaHCO3    2.93g
      加蒸餾水至1000ml

      2、ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M

      KH2PO4     0.2g
      Na2HPO4&middot;12H2O    2.9g
      NaCl     8g
      KCl    0.2g
      Tween-20 0.05%    0.5ml
      加蒸餾水至1000ml

      3、ELISA實驗稀釋液:
      牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
      加洗滌緩沖液至100ml
      或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。

      4、ELISA實驗終止液(2M H2SO4):
      蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸98%、21.7ml。

      5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

      0.2M Na2HPO4(28.4g/L)     25.7ml
      0.1M 檸檬酸(19.2g/L)    24.3ml
      加蒸餾水50ml

      6、ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液:

      TMB(10mg/5ml無水乙醇)    0.5ml
      底物緩沖液(PH5.5)    10ml
      0.75%H2O2     32&mu;l

      7、ELISA實驗ABTS使用液:

      ABTS    0.5mg
      底物緩沖液(PH5.5)    1ml
      3%H2O2    2&mu;l

      8、ELISA實驗封閉液:
      牛血清白蛋白(BSA) 5g
      加洗滌緩沖液至100ml
      值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。

      為了保證ELISA實驗的準確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉污染。

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