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      大鼠肝脂肪酸結合蛋白ELISA試劑盒科研技術實驗

      更新時間:2021-02-20      瀏覽次數:1947

      1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
      2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
      3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
      4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
      5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

       實驗原理
      用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

      標本的采集及保存
      1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      3. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      4. 樣本處理:血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
      注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

      操作技巧:
      A、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
      B、合理安排檢測量,以免反應板過多造成洗板等待時間長。
      C、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
      D、要盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數據的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。
      E、樣品稀釋液應用加液器加注,并經常校對其準確性。

       

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