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      談談ELISA實驗中關于跳孔的疑問及解決方法

      更新時間:2021-08-10      瀏覽次數:1066
        今天小編給大家講講ELISA實驗中關于跳孔的疑問及解決方法:
       
        問:我剛配置試劑的時候中斷了,這是否會影響我的實驗結果?
       
        答:這可能會導致產生波動的曲線。在移液之前確定所有的標準品或者樣品是否配制完好。請在試劑配制完的15-20分鐘內滴加入板內。(除非特別說明)
       
        問:我是否需要一個多道移液器?
       
        答:在配制諸如底物,酶結合物,或者稀釋液的時候,最好選擇連續或多道移液器。
       
        問:如果我沒有平衡試劑會怎樣?
       
        答:沒有平衡的試劑會導致孔之間溫度不均,使整個酶標板的信號產生變異。除非特別說明,試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。
       
        每次檢測都會有推薦的孵育時間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長的孵育、間。所以最好使用說明書上推薦的孵育溫度和時間。
       
        問:我是否需要蓋板?
       
        答:參看試劑盒內說明書。如果說明書內的實驗步驟中有推薦使用蓋板,則在使用時應選用與酶標板配套的蓋板,使邊緣與酶標板緊密契合。如果蓋板的一邊突起,則會產生信號的差別。
       
        問:酶標儀的設置怎樣影響我的結果?
       
        答:對于底物測定,如果讀數時間等于或超過2秒/孔,使從第一孔到最后一孔在讀書時存在時間上的延誤,會導致結果的異變。在底物反應階段,辣根過氧化物酶會一直作用直到底物反應*。而由于時間的延誤,底物越來越少,底物反應也受到影響。將酶標儀的讀數時間設定為1.0秒/孔。
       
        問:我是否可以根據自己的方案來調整孵育時間?
       
        答:更改孵育時間或溫度會導致檢測不能達到平衡或過度反應。請按照說明書推薦的孵育時間和溫度操作。如果同時進行多項檢測,對每孔必需分別計時已避免孵育不足或過度孵育。
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